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ihc染色前沿信息_he染色的基本步骤(2024年11月实时热点)

内容来源：冲顶技术团队所属栏目：教程更新日期：2024-11-26

ihc染色

协和病理会诊，一文搞定！为了帮助大家更好地了解北京协和医院的病理会诊流程，我特意整理了一份详细的指南，希望能对你们有所帮助。以下是我个人的经验总结，供大家参考。 𐟌Ÿ 准备工作首先，记得带上所有原医院的病理报告，包括所有的HE和IHC染色切片。如果有白片，也尽量带上。其他病历、手术记录和检查结果如果有的话也可以带上，但不是必须的。建议先看一下我整理的流程图，有个大致的印象。 𐟌Ÿ 挂号在协和医院的app上可以挂到普通号或特需号。如果你比较着急或者有大量的切片需要会诊，建议挂特需号。 𐟌Ÿ 取号和报道不管你是从哪里来的，先在自助机上试一下报到，如果不行再去人工窗口。如果有任何问题，可以问一下穿小红帽的工作人员。 𐟌Ÿ 等待如果你是在人工窗口取的号，记得把条子交给穿小红帽的工作人员进行报道。自助机报道的则不需要。然后耐心等待屏幕上的叫号。 𐟌Ÿ 递交材料叫到你的名字后，把之前准备好的材料交给病理科的小屋里的医生。你关心的问题在之前看过的流程图里基本都有说明，所以不需要重复问。 𐟌Ÿ 缴费材料交完后，你需要去缴费。先在自助机上试一下，不行再去人工窗口。缴完费后记得保存好所有的单子。 𐟌Ÿ 回执缴费后，病理科的工作人员会给你一个回执，凭这个回执日后可以来取回材料。 𐟌Ÿ 打印报告过了回执上写明的工作日后，凭回执到自助机上打印报告。如果不会操作，可以问一下穿小红帽的工作人员。 𐟌Ÿ 取回切片最后，拿出回执给窗口的工作人员，就可以取回你的切片了。 ⚠️ 其他注意事项可能还需要追加做白片或蜡块，留意手机app，欠费要及时补缴。基因检测在咨询台旁边的热水房隔壁。如果切片包括组织学和细胞学，因为是两位教授看，所以要分别收费。先总结这些，如果有更多信息我会持续更新。有任何问题随时可以问我，祝大家身体健康！❤️

小鼠烧伤模型建立与评估全攻略 𐟐�PF级Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6周，体重18g~20g。 𐟔堥ꌥˆ†组：正常对照组模型组阳性药组受试药组（三个剂量组） 𐟓… 实验周期：4-6 weeks 𐟔젥𛺦衦–𙦳•： 1️⃣ 烧伤造模过程：戊巴比妥钠麻醉小鼠。剃毛器剃去小鼠背部毛，使用硫化钠脱毛至无毛。将小鼠四肢和尾部固定于超净台上，间隔排列。水浸湿的纸片（2.0cm㗳.5cm，占体表面积10%）放在小鼠背部。滴加乙醇，打火机点燃，计时，到时用湿布熄火。预实验确定合适的烧伤时间。 2️⃣ 烧伤后护理：烧伤当天，腹腔注射葡萄糖盐水0.3-0.4 mL。第2天灌胃牛奶0.2-0.3 mL。第3天，取1只正常小鼠和1只烧伤小鼠处死，取材。治疗方式：A、B组涂抹药物，C组喷上喷剂。烧伤后7天内每天早晚各给药一次，厚度1mm；第8天起每天给药一次。 3️⃣ 取材：烧伤后2、7、14、30、45、60天分别处死A、B组各1只小鼠。记录小鼠体重和创面变化（拍大体照）。取材：麻醉后摘眼球取血，提血清，置于-80度保存。烧伤创面分两份，一份福尔马林保存，另一份液氮冷冻保存。 𐟔 应用疾病模型：皮肤观察：观察伤处愈合情况，记录体重变化、创面愈合时间、感染情况、愈合后瘢痕情况，创面愈合率等。组织病理学： HE染色：取烧伤创面连同周边皮肤约0.5 cm，平铺于滤纸上，固定于10％福尔马林内，切片厚度为5 ，苏木素一伊红(HE)染色。 IHC染色：取石蜡切片，进行Ki67染色。 𐟓Š 计量资料以均数ⱦ ‡准差（x Ɐ𝓯𜉨ᨧ亯𜌩‡‡用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显著差异。

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1500㎡P2实验室，专业外包 𐟌Ÿ 动物实验外包与辅导服务 𐟌Ÿ 𐟏ž️ 拥有1500平方米的P2级实验室 𐟔젦供医学实验、生物实验、动物实验、细胞实验等外包服务 𐟓Š 流式细胞检测、荧光定量qPCR检测、免疫组化、IHC、病理染色、Western Blot、蛋白质免疫印迹等实验服务 𐟔砥ˆ†子生物学与医学实验指导，包括但不限于各种载体构建、克隆、PCR、qPCR、WB蛋白检测、ELISA、IF等 𐟏력狀🤸‹到实验室进行实操体验我们提供全面的实验服务，满足您的各种需求，确保实验结果准确可靠。

𐟔젥…視𙤽实验外包服务 𐟔슦ˆ‘们提供全方位的实验外包服务，涵盖多种实验类型，包括细胞实验、动物实验、分子实验以及整体课题实验等。𐟔찟�笊我们的服务内容还包括药代动力学实验、包埋切片及各种特殊染色、IHC、IF、多重免疫荧光、Tunel、Fish等。𐟌ˆ𐟔 此外，我们还提供切片全景扫描、激光共聚焦、透射/扫描电镜、病理分析、电镜分析以及WB、PCR、ELISA、生化检测等多种实验技术。𐟔�’ኊ我们可以通过线上与科研团队进行答疑，并且欢迎实地考察参与其中，有专人指导。𐟑袀𐟏밟‘颀𐟏뀀

如何避免封片时的气泡：实用技巧分享在进行各种染色，如IHC、IF、HE、Massion等时，封片都是一个令人头疼的问题。如何避免气泡的产生？有时候，没有绝对正确的方法，只要有效就行。以下是一些实用的技巧： 𐟌Ÿ 常规方法：用手或镊子夹住盖玻片的一端，另一端靠在载玻片上，使盖玻片与载玻片呈45度角。然后缓慢放下盖玻片，使其接触液体，这样可以避免气泡的产生。如果不小心出现气泡，可以在盖玻片一侧加水，另一侧用吸水纸吸，把气泡驱出。 𐟌€ 减少气泡的小技巧：将mounting solution先分装在1.5ml的EP管中，高速离心。取一200ul的tip用手指堵住一头，缓慢吸进后，弃去tip头部的溶液，缓慢滴在组织上。保持切片干净，缓慢从一侧放下载玻片。取一块透明胶，部分反折。反折的部分没有粘性，适合用手指捏住，非反折的部分保持粘性，可以用来黏住盖玻片。盖盖玻片时，左手手指轻轻固定住盖玻片的一端使之与载玻片接触。将透明胶的非反折部分粘在盖玻片的另一端上，右手手指捏住透明胶反折部分，缓慢放下，使盖玻片与载玻片的成角缓慢变小，最终接触液滴。封片树胶的浓度要适中，过稀易出现大气泡、溢胶污染切片，影响观片。过稠易出现后薄不均、折光差，及细小气泡。封固过程中，最好直接从二甲苯中取出封片，保持二甲苯不挥发，避免组织大片破裂。切片封固后应放置一段时间，树胶完固后，才能归档，以免溢胶切片相互粘连重叠。根据环境温湿度，一般应放置7～15天。归档切片应放置干燥避光处，避免切片褪色。如果你有其他好方法，欢迎一起分享！

免疫组化定量分析：从零开始到高手指南免疫组化（IHC）是病理学中常用的一种技术，用于检测组织中的特定蛋白质。在进行免疫组化分析时，定量是一个关键步骤，因为它可以帮助我们了解蛋白质的分布和表达水平。今天，我将带你一步步完成免疫组化的定量分析，特别是使用ImageJ和Fiji软件。第一步：图像去卷积 𐟓𘊩斥…ˆ，我们需要对图像进行去卷积，以分离出不同的染色层。在ImageJ中，选择“Image”菜单下的“Color”选项，然后选择“Colour Deconvolution”。这一步的目的是将细胞核染色（通常是蓝紫色）从总染色中扣除，留下DAB显色信号（通常是红棕色）。第二步：选择窗口 𐟪Ÿ 在去卷积后，你会看到多个窗口，选择第二个窗口，通常是红棕色的那个。这个窗口将包含我们感兴趣的DAB信号。第三步：转换灰度为光密度值 𐟌ˆ 接下来，我们需要将灰度信号值转换为光密度值（OD）。这可以通过“Analyze”菜单下的“Calibrate”功能来实现。在弹出的窗口中，选择“Uncalibrated OD”，然后点击OK。这一步非常关键，因为它将灰度值转换为光密度值，这是定量分析的基础。第四步：调整阈值 ⚙️ 调整阈值是定量分析的关键步骤。通过“Image”菜单下的“Adjust”选项，选择“Threshold”。手动调整阈值上下限，使其覆盖我们感兴趣的区域。注意不要点击Apply，因为这样会将图像转换为二值信号图，失去灰度信息。第五步：定量分析 𐟓Š 最后，通过“Analyze”菜单下的“Measure”功能进行定量分析。在弹出的窗口中，可以看到Area（阈值区域覆盖的面积）、Mean（阈值区域的平均OD值）、Min（阈值区域的最小OD值）、Max（阈值区域的最大OD值）以及IntDen（阈值区域的总OD值）等参数。这些参数将为我们提供关于蛋白质表达的重要信息。注意事项 ⚠️ 确保使用Fiji版本：Color Deconvolution功能在Fiji（ImageJ的高版本）中才有，旧版ImageJ不支持此功能。批量处理：可以使用宏功能进行批量分析，提高效率。 Calibrate步骤：这一步非常关键，如果不进行Calibrate，统计得到的是灰度值，而不是OD值。检查结果：通过检查Min和Max值，可以自我验证信号值的准确性。灰度值的范围在[0,255]，而OD值一般不会超过5。通过以上步骤，我们可以使用ImageJ和Fiji软件进行免疫组化定量分析，深入了解组织中特定蛋白质的分布和表达水平。希望这篇指南能帮助你更好地理解和掌握免疫组化定量分析的技术。

【用于乳腺癌！重磅ADC德曲妥珠单抗获FDA优先审评资格】近日，重磅抗体偶联药物（ADC）德曲妥珠单抗（Enhertu，trastuzumab deruxtecan）的补充生物制品许可申请（sBLA）已获美国FDA接受并授予优先审评资格，用于治疗不可切除或转移性HER2低（IHC 1+或IHC 2+/ISH-）或HER2超低（带有膜染色的IHC 0）表达的乳腺癌成年患者，这些患者接受过至少一线转移性内分泌疗法治疗。（阿斯利康官网）

「微博国际医药」「国际创新药闻」重磅ADC获FDA优先审评资格近日，第一三共（Daiichi Sankyo）与阿斯利康（AstraZeneca）共同宣布，其联合开发的重磅抗体偶联药物（ADC）Enhertu（trastuzumab deruxtecan）的补充生物制品许可申请（sBLA）已获美国FDA接受并授予优先审评资格，用于治疗不可切除或转移性HER2低（IHC 1+或IHC 2+/ISH-）或HER2超低（带有膜染色的IHC 0）表达的乳腺癌成年患者，这些患者接受过至少一线转移性内分泌疗法治疗。美国FDA预计在2025年第一季度完成审评。根据新闻稿，如果获得批准，Enhertu将成为转移性乳腺癌患者化疗前使用的首个HER2靶向ADC疗法。乳腺癌是第二大最常见的癌症，也是全球癌症相关死亡的主要原因之一。2022 年诊断出超过 200 万例乳腺癌病例，全球死亡人数超过 665,000 人。虽然被诊断患有早期乳腺癌的患者的生存率很高，但只有大约 30% 的被诊断或进展为转移性疾病的患者预计在诊断后能活五年。

免疫组化IHC实验全流程详解免疫组化（IHC）是一种利用抗体与抗原高度特异性结合的原理，通过化学方法显示抗体结合部位，从而对组织或细胞中的未知抗原进行定性、定位或定量研究的技术。以下是IHC实验的详细步骤： 1️⃣ 肝脏组织处理：将肝脏组织进行石蜡包埋、切片，然后脱蜡和水化。 2️⃣ 抗原修复：将组织切片置于装满柠檬酸抗原修复缓冲液的修复盒中，放入微波炉中进行抗原修复。中火加热8分钟至沸腾，静置8分钟后保温，再转中低火7分钟。自然冷却后，将玻片置于PBS缓冲液中，在摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。 3️⃣ 阻断内源性过氧化物酶：将切片置于3%双氧水溶液中，室温避光孵育25分钟。然后将其置于PBS中，在摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。 4️⃣ 血清封闭：用组化笔在切片周围画一个组化圈，在圈内滴加3%BSA，均匀覆盖组织，室温封闭30分钟。 5️⃣ 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一定稀释比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4Ⰳ孵育过夜。 6️⃣ 加二抗：将玻片置于PBS中，在摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后在组化圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，室温孵育50分钟。 7️⃣ DAB显色：将玻片置于PBS中，在摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后在组化圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，当出现棕黄色时即使用自来水冲洗切片，以终止显色。 8️⃣ 复染细胞核：苏木素复染3分钟左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。 9️⃣ 脱水封片：将切片依次按照75%乙醇5分钟→85%乙醇5分钟→无水乙醇Ⅰ 5分钟→无水乙醇Ⅱ 5分钟→正丁醇5分钟→二甲苯Ⅰ 5分钟进行脱水透明。将切片从二甲苯拿出来稍晾干，即可用中性树胶封片。 𐟔Ÿ 染色观察：使用全自动玻片扫描仪对玻片进行扫描，将图片导出后使用Image J软件统计阳性区域。免疫组化图片使用光学显微镜进行观察拍照。

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