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RALF1&FERONIA,如何促根? 𑠥覤物生长过程中,根细胞的生长和分裂至关重要。近期,科学家们发现了一种名为RALF1和FERONIA的分子,它们在调节根细胞生长中起到了关键作用。 实验结果显示,在稳态条件下,FER-GFP(绿色荧光蛋白标记的FERONIA)与细胞膜染色剂FM4-64共定位,表明FER-GFP在细胞膜上分布。此外,FER-GFP还与TGN标记蛋白VHA-a1-mRFP、Golgi标记蛋白MEMB12-mCherry以及晚期内质体标记蛋白ARA7-RFP共定位,这些结果暗示了FER-GFP在细胞内的动态分布。 🠥𝓦南芥幼苗根部用BFA(一种囊泡运输抑制剂)和CHX(一种蛋白合成抑制剂)处理后,FER-GFP与FM4-64共定位于BFA聚合体中,这表明FER-GFP可能参与了囊泡运输的过程。同时,FER-GFP与TGN标记蛋白VHA-a1-mRFP在BFA聚合体中的共定位进一步支持了这一观点。 𑠨🛤𘀦研究发现,在RALF1处理3小时后,FER-GFP与TGN标记蛋白VHA-a1-mRFP、高尔基标记蛋白MEMB12-mCherry以及晚期内质体标记蛋白ARA7-RFP的共定位发生了变化。这些结果提示我们,RALF1可能通过与FERONIA的相互作用,调节了细胞内囊泡运输和细胞生长。 🠦䖯IN2-GFP(绿色荧光蛋白标记的PIN2)在RALF1处理后,其荧光在PM(质膜)上的分布发生了变化。处理后的PIN2-GFP内化到液泡中,这表明RALF1可能通过影响PIN2的定位和功能,进一步调节根细胞的生长。 这项研究发表在《Development》杂志上,为我们理解植物根细胞生长的分子机制提供了新的视角。未来的研究将进一步探讨RALF1与FERONIA的相互作用如何精确地调节植物根细胞的生长和分裂。
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液泡与叶绿体亚细胞定位的巧妙展示犰🠥𖧻🤽定位的直观展示 通过瞬时转化烟草原生质体,我们可以观察到叶绿体的自发荧光。当我们将GFP融合在PnToxA的叶绿体定位序列ToxA62-132上,并观察其荧光信号时,发现它与叶绿体标记物RUB1sp-mCherry的荧光完全重合。这表明ToxA62-132-GFP确实定位在叶绿体中。 砦𝍧巧妙推断 在另一项研究中,作者通过将GFP融合在GmVTL1a的N端,并观察其在烟草原生质体中的荧光信号,发现GFP的荧光仅在液泡膜上观察到。这种观察方法虽然不能直接证明GmVTL1a定位在液泡膜上,但通过与细胞膜标记物FM4-64FX的信号区分开来,我们可以间接推断出GmVTL1a确实定位在液泡膜上。 点状荧光的可能位置 有时候,我们观察到的荧光呈点状,并且与叶绿体的marker重合。这种情况下,我们可以考虑其是否定位在内囊体或质体上。例如,表达PGTG_00164-YFP或PGTG_06076-YFP的细胞显示叶绿体点状定位,这提示我们这些蛋白可能定位在类囊体或质体上。 젤𛆨定位的间接证明方法 在学习过程中,如果遇到不能直接证明的亚细胞定位问题,可以尝试使用间接证明的方法。通过与已知的细胞结构标记物进行比较,我们可以推断出目的基因的亚细胞定位。这种方法在科学研究中非常实用,能够帮助我们更准确地理解细胞的结构和功能。
쥮验室必备质粒大全ኰ즎⧴⥮验室的质粒世界,你准备好了吗?从常用的标签质粒如HA、Flag、EGFP,到dsRed和mCherry,我们一应俱全!无论是真核还是原核表达载体,我们都有!欢迎各位载体构建达人加入交流,共同打造实验室的质粒宝库! 绿色荧光表达载体pEGFPC1、N1、N3,让你的实验更添一抹绿意!红色荧光表达载体pDsRed2—C1、N1和pmCherryC1、N1,让你的视野更加绚烂多彩!我们还有pCDNA3.13XHA、pECMV-3XFlag等各式质粒等你来挑选,满足你的不同实验需求!核表达载体pET32a(+)、pGEX4T1,以及酵母双杂交质粒pGADT7、pGBKT7,让你的研究更加深入! ᦛ细胞器质粒如DsRed2-ER(内质网)、DsRed2-Mito(线粒体)和DsRed2-Glogi(高尔基体),让你的研究更加精准!슊无论你是生物学的在读博士,还是分子免疫方向的专家,这里都有你需要的质粒和资源!快来加入我们,一起探索实验室的无限可能吧!
如何解读载体图谱? 在基因工程和分子生物学实验中,理解载体图谱的基本元素至关重要。载体图谱通过图形化方式展示了载体的各个组成部分及其相互关系。以下是载体图谱中一些关键元素的识别标志和功能理解: 1️⃣ 复制起始位点(Ori):在图谱中,复制起始位点通常以一个小圆圈或箭头表示,旁边可能标有“Ori”或类似的缩写。箭头指向的方向表示DNA复制的起始方向。这是质粒DNA分子上启动复制的特定区域,对于质粒在宿主细胞内的稳定复制至关重要。 2️⃣ 筛选标记(Selection Marker):筛选标记通常以特定的基因或基因片段表示,旁边会标注相应的抗生素缩写,如“AmpR”(氨苄青霉素抗性)、“KanR”(卡那霉素抗性)等。这些标记基因使得携带它们的质粒能够在含有对应抗生素的培养基上生长,从而方便后续的阳性克隆筛选。 3️⃣ 多克隆位点(MCS):多克隆位点表现为一系列并列的短横线或方框,每条线或每个方框代表一个限制性内切酶的识别位点。这些位点通常紧密排列在一起,形成一段连续的DNA序列。MCS是插入外源DNA片段的区域,通过选择适当的限制性内切酶,可以在MCS中的特定位置切割DNA,然后插入外源基因。 4️⃣ 启动子(Promoter):启动子通常以箭头表示,箭头方向指向转录起始点。在某些图谱中,启动子可能会用特定的符号或颜色标注。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位,它决定了基因转录的起始点和转录的方向。 5️⃣ 终止子(Terminator):终止子在图谱中可能以特定的序列或符号表示,如一段特定的DNA序列或一个垂直的线段。终止子提供转录终止的信号,确保RNA聚合酶在正确的位置停止转录,形成完整的mRNA分子。 6️⃣ 其他特殊元件:这些元件可能包括融合表达标签(如Flag、GST等)、荧光蛋白标签(如GFP、mCherry等)、报告基因(如lacZ、GFP等)等。它们在图谱中通常以特定的符号、颜色或标签表示。这些特殊元件为基因表达、蛋白质纯化、细胞定位等实验提供了便利。 通过识别和理解这些关键元素,可以更好地理解载体图谱,从而在基因工程和分子生物学实验中取得更好的进展。
质粒构建时如何选择合适的蛋白标签? 蛋白标签是一种在DNA体外重组技术中常用的工具,它们与目的蛋白融合表达,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。那么,在质粒构建时,我们应该如何选择合适的蛋白标签呢?以下是一些常用的蛋白标签及其应用场景: 6xHis标签 6xHis标签可以插入目的蛋白的C末端或N末端,主要用于重组蛋白的分离纯化。这种标签在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化时非常有用。常见的带有6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等。 Flag标签蛋白 銆lag标签蛋白广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等领域。常见的带有Flag标签的载体有pESC-His、pFLAG-CMV2、pENTR4-FLAG等。 C-Myc标签 C-Myc标签是一个含11个氨基酸的小标签,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc标签已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。常见的载体有pCMV-MYC、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pCMV-RFP-C-Myc、pCMV-Myc等。 eGFP/eCFP/eYFP/mCherry标签 这些标签分别是增强型绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白和单体红色荧光蛋白,具有不同的激发波长发射波长,均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。常见的带有eGFP的载体有pEGFP-N1、pEGFP-C1、pcDNA3.1-EGFP、pIRES-EGFP等。 SUMO标签 SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白,研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣,不但可以进一步提高融合蛋白的表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,提高重组蛋白可溶性等功能。SUMO标签也常用于和其他标签一起应用,作为特异酶切水解位点。常见的带有SUMO标签的载体有pET-SUMO、pET28a-SUMO等。 在选择蛋白标签时,应根据实验的具体目的和需求来决定。希望这些信息能帮助你在质粒构建时做出最佳选择!
流式检测标签类型和特点 流式检查标签 1.小有机分子: ⠠⠥ 括FITC(分子量=389 D)、Alexa Fluor 488(荧光素类似物)、Texas Red(分子量=325 D)、Alexa Fluor 647(分子量=1464 D)、Pacific Blue和Cy5(分子量=762 D)。这些分子用于抗体偶联,具有一致的发射光谱和较小的斯托克斯位移,适用于荧光标记。 2.藻胆蛋白: ⠠⠥您⨛白(PE)、藻蓝蛋白(APC)和藻红蓝蛋白(PerCP),这些大分子蛋白质具有大斯托克斯位移和稳定的发射光谱,适合定量流式细胞术。 3.量子点: ⠠⠥导体纳米晶体,具有与纳米晶体尺寸相关的紧密荧光发射光谱,适用于多参数实验。 4.聚合物染料: ⠠⠥悂rilliant Violet(BV)、Brilliant Ultraviolet(BUV)和Brilliant Blue(BB),具有高稳定性和光稳定性,适用于多参数实验。 5.串联染料: ⠠⠩过荧光共振能量转移(FRET)技术,将藻胆蛋白或聚合物染料与小有机荧光体耦合,增加可用荧光素,适用于多参数实验。 6.金属偶联物: ⠠⠧褺质谱细胞术的抗体与镧系元素系列的单一同位素重金属离子偶联,适用于质谱分析。 7. 荧光蛋白: ⠠⠥悧祅蛋白(GFP)、青色荧光蛋白(CFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(DsRed)、mCherry、mBanana等,作为基因表达的报告系统,广泛应用于流式细胞术。 丰富的标签试剂使得流式细胞术能够进行高维度、高灵敏度的细胞分析,为细胞生物学研究提供了强有力的工具。#广州华韵生物科技有限公司#
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2021).a. mcherry
等方法制备zbe冻干粉,通过uplc
cas-098 lentiguide-mcherry-t2a-puro慢病毒
mcherrypsuper.retro.neopsuper.retro.neo+gfppsilencer3
camkiimcherry注射到gad2-cre小鼠的dca3中
实验室常见荧光蛋白选择与应用rfps(红色荧光蛋白):mcherry具有优异光
scenom00190(yeast)-
mcherry-231或mcherry-231乳腺癌细胞
清除衰老巨噬细胞有望成为肺癌潜在的治疗途径
pcmv-c-dsred
pcas9-mcherry empty哺乳编辑质粒
gfp/egfp/ecfp/eyfp/mcherry标签
9296质粒类型:慢病毒载体96载体抗性
绿色荧光蛋白标记的hbve抗原
结果含cre重组酶腺病毒组在mpfc观察到强烈的mcherry荧光信号
可以增强植物抗性,研究团队利用表达gfp和mcherry的马铃薯x病毒
gfp/egfp/ecfp/eyfp/mcherry标签strep
tagrfp 158t红色荧光蛋白mruby荧光蛋白
火龙果中的糖分太高?那是你没用dof转录因子技术调控
cas9红色荧光px333-egfp--cas9绿色荧光px333
a1-mrfp,golgi marker memb12-mcherry和late
临床_关节_信号
昨天做的dapi和mcherry的imagestitching
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egfp,而dmpfc内的gaba能神经元选择性的表达hchr2-mcherry
pbluescriptr
丝状真菌蛋白表达质粒pcambia1303
primary antibody: pan
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标签抗体flaghamycgfpmcherrybeads
斑马鱼颅缝建立过程中的细胞转变
mcherry antibody
结构光照明显微成像
华师大程义云/华南理工王辉/上海交大一附院王长平《am》:具有自噬
tcci研究员发现快速眼动睡眠的重要开关
定量评估荧光素酶/gfp和mcherry/gfp在mef细胞中由dat和erastin
在rp27p::mcherry转化菌株中,mcherry荧光的在观察的时间点内表达量
具体机制,在体外用mcherry标记的msc
郑春福教授发表march蛋白靶向furin阻断ebola病毒糖蛋白切割文章
对侧 bla-nac 投射的激活会引起 d2-msn 激活增强为了标记受同侧或对
sds-page was performed with 20 ng of purified recombinant
egfp,而dmpfc内的gaba能神经元选择性的表达hchr2-mcherry
阳性sst神经元的密度增加,值得注意的是,c
pcmv-mem-mcherry-sv40-neo哺乳细胞细胞膜亚细胞定位质粒开票
该图像描绘了斑马鱼的头部,上面皮细胞表达棕榈
网易首页>网易号>正文申请入驻>图4 vmhvl通路在重复获胜中出现单调
egfp-ramp4工具在小鼠胚胎成纤维mef细胞中监测内质网自噬
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